Разработка и валидация методики количественного определения полисахаридов в цветках липы

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Введение. Цветки липы – фармакопейное лекарственное растительное сырье (ЛРС), содержащее полисахариды. В настоящее время, согласно действующей нормативной документации, оценка содержания биологически активных веществ (БАС) проводится только по флавоноидам. Для совершенствования стандартизации цветков липы, предлагается актуальными разработка и валидация методики спектрофотометрического определения полисахаридов с антроновым реактивом.

Цель работы – разработать и валидировать методику количественного определения полисахаридов в цветках липы.

Материал и методы. При разработке и валидации методики нами использован метод дифференциальной спектрофотомерии, основанный на реакции комплексообразования сахаров гидролизата липы с антроновым реактивом. Полученный в результате реакции комплекс имеет максимум поглощения 625±2 нм, в качестве сравнения использовался раствор стандартного образца (СО) глюкозы. В работе изучали влияние условий экстракции на выход полисахаридов из сырья: размер частиц сырья, соотношение сырья и экстрагента, продолжительность экстракции, а также подбирали оптимальные условия для проведения реакции комплексообразования. Валидацию методики проводили по показателям: специфичность, линейность и репрезентативность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость).

Результаты. Определены оптимальные параметры экстракции полисахаридов из сырья (трехкратная экстракция водой дистиллированной на водяной бане, соотношение «сырье – экстрагент» – 1:30 в течение 30 мин, размер частиц сырья – 2,0 мм). Подобраны условия проведения реакции комплексообразования (соотношение «экстракт-комплексообразователь» – 1:2, комплексообразователь – антроновый реактив, появление устойчивой окраски раствора через 25 мин). При проведении валидации разработанной методики установлено, что валидационные характеристики находятся в пределах критериев приемлемости. При анализе цветков липы установлено, что содержание восстанавливающих сахаров в составе полисахаридов составило 1,9–3,1%.

Заключение. Определены оптимальные параметры экстракции полисахаридов из сырья, подобраны условия проведения реакции комплексообразования, проведена валидация методики. Установлено суммарное содержание восстанавливающих сахаров в составе полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в цветках липы с использованием дифференциальной спектрофотометрии.

Об авторах

Михаил Николаевич Родин

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет)

Email: rodin_m_n@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0001-9532-6879

аспирант, ассистент Института фармации им. А.П. Нелюбина

Россия, Москва

Дмитрий Олегович Боков

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет); ФИЦ питания и биотехнологии

Email: bokov_d_o@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0003-2968-2466

кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтического естествознания Института фармации им. А.П. Нелюбина; научный сотрудник лаборатории химии пищевых продуктов

Россия, Москва; Москва

Сабина Джейхуновна Кахраманова

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет); Научный центр экспертизы средств медицинского применения

Email: ksd113@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-8160-7829

эксперт 1 категории лаборатории фитопрепаратов и гомеопатических средств Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Россия, Москва; Москва

Ирина Александровна Самылина

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет)

Автор, ответственный за переписку.
Email: samylina_i_a@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0002-4895-0203

доктор фармацевтических наук, член-корреспондент РАН, профессор кафедры фармацевтического естествознания

Россия, Москва

Список литературы

  1. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том II, ФС.2.5.0024. «Липы цветки». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/2/2-3/lipy-tsvetki/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume II, PM.2.5.0024. «Linden flowers». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/2/2-3/lipy-tsvetki/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  2. Родин М.Н., Боков Д.О., Лазарева Н.Б. Исследование профиля флавоноидов цветков липы. Фармация. 2024; 73 (3): 10–4. doi: 10.29296/25419218-2024-03-02. [Rodin M.N., Bokov D.O., Lazareva N.B. Study of flavonoids profile of linden flowers. Farmatsiya. 2024; 73 (3): 10–4. doi: 10.29296/25419218-2024-03-02 (in Russian)].
  3. State Register of Medicinal Remedies Retrieved from: https://grls.minzdrav.gov.ru/Default.aspx
  4. Дьякова Н.А., Сливкин А.И., Гапонов С.П. и др. Особенности накопления восстанавливающих сахаров цветками липы сердцевидной (Tilia cordata Miller, 1768) в Воронежской области. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021; 10 (4): 147–53. doi: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-147-153. [Dyakova N.A., Slivkin A.I., Gaponov S.P., Bobina E.A., Shishorina L.A. Accumulation of Reducing Sugars by Small-leaved Linden Flowers (Tilia cordata Miller, 1768) in the Voronezh Region of Russia. Drug development & registration. 2021; 10 (4): 147–53. doi: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-147-153 (in Russian)].
  5. Kosakowska O.K., Baczek K., Przybył J.L. et al. Intraspecific variability in the content of phenolic compounds, essential oil and mucilage of small-leaved lime (Tilia cordata Mill.) from Poland. Industrial Crops and Products. 2015; 78: 58–65. doi: 10.1016/j.indcrop.2015.10.002.
  6. Попов Д.М., Зарубина Н.В. Сравнительное качественное и количественное определение углеводов в цветках и листьях липы сердцевидной. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2013; 2: 50–3. [Popov D.M., Zarubina N.V. Comparative qualitative and quantitative determination of carbohydrates in flowers and leaves of small-leaved lime. Drug development & registration. 2013; 2: 50–3 (in Russian)].
  7. Chinou I. Assessment report on Tilia cordata Miller, Tilia platyphyllos Scop., Tilia x vulgaris Heyne or their mixtures, flos. European Medicines Agency/Science Medicines Health. 2012.
  8. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XIV изд., том IV. [Электронное издание]. Режим доступа: https://femb.ru/record/pharmacopea14 [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XIV ed., volume IV. [Electronic edition]. Access mode: https://femb.ru/record/pharmacopea14 [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)]
  9. Боровикова Н.А., Попов Д.М., Селезенев Н.Г. Исследование водных извлечений из корневищ с корнями девясила, цветков липы и листьев подорожника. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2013; 3: 62–8. [Borovikova N.A., Popov D.M., Selezenev N.G. Study of aqueous extracts of elecampane rhizomes with roots, linden flowers and plantain leaves. Drug development & registration. 2013; 3: 62–8 (in Russian)].
  10. Попов Д.М., Боровикова Н.А., Селезенев Н.Г. Метод ВЭЖХ и определение углеводов в лекарственном растительном сырье. Фармация. 2014; 1: 3–5. [Popov D.M., Borovikova N.A., Selezenev N.G. HPLC method and determination of carbohydrates in medicinal plant raw materials. Farmatsiya. 2014; 1: 3–5 (in Russian)].
  11. Жаркова Т.А., Ляшенко А.О. Фармакогностичское исследование листьев липы сердцевидной, произрастающей в Московской области. Природные соединения и здоровье человека. 2023; 41–6. [Zharkova T.A., Lyashenko A.O. Pharmacognostic study of small-leaved lime leaves growing in the Moscow region. Natural compounds and human health. 2023; 41–6 (in Russian)].
  12. Кахраманова С.Д., Боков Д.О., Самылина И.А. Количественное определение полисахаридов в лекарственном растительном сырье. Фармация. 2020; 69 (8): 5–12. doi: 10.29296/25419218-2020-08-01. [Kakhramanova S.D., Bokov D.O., Samylina I.A. Quantification of polysaccharides in medicinal plant raw materials. Farmatsiya. 2020; 69 (8): 5–12. doi: 10.29296/25419218-2020-08-01 (in Russian)].
  13. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.2.3.0019. «Определение сахаров спектрофотометрическим методом». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-2/1-2-3-metody-kolichestvennogo-opredeleniya/opredelenie-sakharov-spektrofotometricheskim-metodom/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.2.3.0019. «Determination of sugars by spectrophotometric method». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-2/1-2-3-metody-kolichestvennogo-opredeleniya/opredelenie-sakharov-spektrofotometricheskim-metodom/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  14. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.1.0013. «Статистическая обработка результатов физических, физико-химических и химических испытаний». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimicheskikh-ispytaniy/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.1.0013. «Statistical processing of the results of physical, physicochemical and chemical tests». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimicheskikh-ispytaniy/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  15. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.1.0012. «Валидация аналитических методик». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/validatsiya-analiticheskikh-metodik/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.1.0012. «Validation of analytical procedures». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/validatsiya-analiticheskikh-metodik/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  16. Тринеева О.В., Сливкин А.И., Воропаева С.С. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях крапивы двудомной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2014; 1: 138–44. [Trineeva O.V., Slivkin A.I., Voropayeva S.S. Development and validation of the method of quantitative determination of flavonoids in stinging nettle leaves. Vestnik Voronezhskogo Gosudarstvennogo Universiteta. Seriya: Khimiya. Biologiya. Farmatsiya. 2014; 1: 138–44 (in Russian)].
  17. Тринеева О.В., Сливкин А.И. Определение суммы полисахаридов и простых сахаров в листьях крапивы двудомной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2017; 1: 164–9. [Trineeva O.V., Slivkin A.I. Determination of the sum of polysaccharides and simple sugars in the leaves of stinging nettle. Vestnik Voronezhskogo Gosudarstvennogo Universiteta. Seriya: Khimiya. Biologiya. Farmatsiya. 2017; 1: 164–9 (in Russian)].
  18. Барсукова Ю.Н., Мельникова О.А., Мельников М.Ю. Разработка и валидация методики спектрофотометрического определения кислоты аминокапроновой в многокомпонентном гемостатическом средстве. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018; 1: 76–83. [Barsukova Yu.N., Melnikova O.A., Melnikov M.Yu. Development and validation of spectrophotometric techniques of determination of aminocaproic acid in a multi-component hemostatic agent. Drug development & registration. 2018; 1: 76–83 (in Russian)].
  19. Джавахян М.А., Токарева М.Г., Прожогина Ю.Э., Каленикова Е.И. Разработка капсул «Седофлав», стандартизация и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020; 9 (3): 118–27. doi: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-118-127. [Dzhavakhyan M.A., Tokareva M.G., Prozhogina Yu.E., Kalenikova E.I. Pharmaceutical Development of «Sedoflav» Capsules, Standardization and Validation of Flavonoids Assay Methods. Drug development & registration. 2020; 9 (3): 118–27. doi: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-118-127 (in Russian)].
  20. Кутателадзе Г.Р., Федосеева Л.М. Исследования по разработке и валидации методики количественного определения флавоноидов в щавеля кислого траве, заготовленной на территории Алтайского края. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019; 8 (2): 80–6. doi: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-80-86. [Kutateladze G.R., Fedoseeva L.M. Research in the Development and Validation of the Method of Quantitative Determination of Flavonoids in the Common Sorrel Herba, Gathered in the Altai Territory. Drug development & registration. 2019; 8 (2): 80–6. doi: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-80-86 (in Russian)].
  21. Тринеева О.В., Казьмина М.А., Сливкин А.И. Разработка и валидация методики определения суммы свободных и связанных простых сахаров в плодах облепихи крушиновидной. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2017; 1: 138–43. [Trineeva O.V., Kazmina M.A., Slivkin A.I. Development and validation of methods for determining the amount of free and related simple sugars in the fruit of sea buckthorn. Drug development & registration. 2017; 1: 138–43 (in Russian)].

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Спектры поглощения (1 – водного извлечения из цветков липы; 2 – СО глюкозы)

Скачать (198KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Влияние концентрации комплексообразователя на результаты определения восстанавливающих сахаров в извлечении

Скачать (171KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Влияние степени измельченности ЛРС на выход полисахаридов в извлечении

Скачать (137KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Влияние времени экстракции на содержание восстанавливающих сахаров в извлечении

Скачать (158KB)
Метаданные
6. Рис. 5. График зависимости оптической плотности от концентрации глюкозы

Скачать (219KB)
Метаданные

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».