Получение и оценка клинической эффективности рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 для диагностики сифилиса

Цель. Получение нового рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 и изучение эффективности его клинического использования при диагностике сифилиса. Материал и методы. Для получения целевого рекомбинантного антигена T. pallidum фрагмент ДНК возбудителя сифилиса, кодирующий белок Tp0453, был клонирован в вектор pET28а. Для наработки полученной генетической конструкции вектор вводили в штамм E. coli Top10, отбирая канамицин-устойчивые колонии. Специфичность клонирования подтверждена методом секвенирования по Сенгеру. Гетерологическую экспрессию рекомбинантного антигена T. pallidum проводили в штамме E. coli BL21 (DE3). Очистка рекомбинантного варианта белка T. pallidum Tp0453, содержащего дополнительную последовательность из 6 остатков гистидина на N-концевом участке молекулы, осуществлялась методом металл-хелатной хроматографии. Полученный гомогенный рекомбинантный белок T. pallidum Tp0453 был использован в качестве антигена для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке больных сифилисом с использованием иммунологического биочипа. Результаты и заключение. Применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к T. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании сыворотки крови, полученной от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. На основании приведенных данных можно сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка в качестве дополнительного антигена для диагностики сифилиса. Включение нового антигена в тест-системы для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга или иммуночипа) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к T. pallidum.

антигены T. pallidum, сифилис, рекомбинантные белки, биочипы